對
電熱培養(yǎng)箱所需的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的種類和使用建議,也有一定的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范:細(xì)胞培養(yǎng)主要重點(diǎn)在于保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。
1、顯微鏡:倒置式顯微鏡是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室日常工作常規(guī)*設(shè)備,主要用于日常了解細(xì)胞的生長情況并觀察有無污染發(fā)生。如資金允許,建議選用配置有照相系統(tǒng)的高品質(zhì)相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時(shí)電影拍攝裝置等,可隨時(shí)拍攝并記錄細(xì)胞生長情況。
超凈工作臺:目前絕大部分細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室使用超凈工作臺實(shí)現(xiàn)無菌操作,具有操作簡單、安裝方便、占用空間小且凈化效果很好。超凈工作臺主要有兩種——側(cè)流式(垂直式)和外流式(水平層流式)。工作原理一般是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過無菌區(qū),從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。
2、(1)側(cè)流式工作臺:空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過工作臺面流向?qū)?cè),也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè),形成氣流屏障保持工作區(qū)無菌,工作臺結(jié)構(gòu)為封閉式;
(2)外流式工作臺:凈化后的空氣面向操作者流動(dòng),因而外方氣流不致混入操作,工作臺結(jié)構(gòu)為開放式,但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作對操作者不利。超凈工作臺應(yīng)需要定期請有關(guān)部門檢查潔凈度,符合要求的超凈工作臺其潔凈度應(yīng)達(dá)到100級,用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數(shù)量不應(yīng)超過3.5個(gè)/L;空氣流量應(yīng)控制在0.75-1.0m3/s;細(xì)菌菌落數(shù)平均<1個(gè),根據(jù)無菌狀況必要時(shí)需要置換過濾器。
3、培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,一般適生長溫度為37℃,溫差變化不應(yīng)超過±0.5℃。溫度升高2℃時(shí),變不利于細(xì)胞生存,溫度達(dá)到40℃以上細(xì)胞將很快死亡。因此,可控溫的恒溫培養(yǎng)箱、CO2培養(yǎng)箱是選擇。
?。?)恒溫培養(yǎng)箱:應(yīng)選隔水式或晶體管式自控溫培養(yǎng)箱,此類培養(yǎng)箱靈敏度高,溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價(jià)格較便宜,其缺點(diǎn)是只宜于作密閉式培養(yǎng)。
(2)CO2培養(yǎng)箱:目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于穩(wěn)定培養(yǎng)液pH,適用于開放或半開放培養(yǎng)。使用培養(yǎng)瓶時(shí),為使培養(yǎng)瓶內(nèi)與外界保持通氣狀態(tài),可將瓶蓋略微旋松,為避免細(xì)胞被污染,使用這種培養(yǎng)方式時(shí),培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔,需定期用紫外線照射或酒精消毒,同時(shí)培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)放置盛有無菌蒸餾水的水槽,防止培養(yǎng)液蒸發(fā),保持箱內(nèi)相對濕度在100%。
?。?)細(xì)胞培養(yǎng)耗材:培養(yǎng)細(xì)胞的器皿可用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶,萊貝在本篇不做詳細(xì)介紹,這部分知識會(huì)在實(shí)驗(yàn)室耗材知識部分作重點(diǎn)介紹。
4、烘箱(干燥箱):電熱培養(yǎng)箱用于細(xì)胞培養(yǎng)的一些器械、器皿必須烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時(shí),烘箱內(nèi)溫度一般要達(dá)到160℃以上,通常使用鼓風(fēng)式烘箱。其優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻、效果較好,缺點(diǎn)是升溫過程較慢。升溫時(shí)不能先升溫后鼓風(fēng)而應(yīng)鼓風(fēng)與升溫同時(shí)開始,至100℃時(shí),停止鼓風(fēng)。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦,燒焦的碎屑可影響細(xì)胞的生長。消毒后不能立即打開箱門,以免驟冷導(dǎo)致玻璃器皿破裂,應(yīng)等溫度自然下降至100℃以下后可開門。
5、水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)液體的配制用水以及清洗細(xì)胞培養(yǎng)器皿用水都必須事先經(jīng)過嚴(yán)格的純化處理。目前有多種純化方法相結(jié)合,可使普通水純化為純水和超純水的純水裝置使用非常靈活方便,可掛壁式、臺式、可配儲(chǔ)水箱、也可直接用分液槍、還可根據(jù)各類實(shí)驗(yàn)用水要求選擇配置殺菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉熱源、內(nèi)毒素的超濾型純水裝置。
6、冰箱:電熱培養(yǎng)箱備設(shè)備,應(yīng),不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對細(xì)胞有害的物質(zhì),且應(yīng)保持清潔。一般包括普通冰箱、低溫冰箱和超低溫冰箱。(1)普通冰箱:儲(chǔ)存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hanks液試劑等培養(yǎng)用的物品,可短期保存組織樣本。(2)-20℃低溫冰箱、超低溫冰箱:用于儲(chǔ)存需要冷凍以保持生物活性以及需長時(shí)期存放的制劑,如酶、血清等。